ICS67.140.10 X04 中华人民共和国国家标准 GB/T8314—2013 代替GB/T8314—2002 茶 游离氨基酸总量的测定 Tea—Determinationoffreeaminoacidscontent 2013-12-31发布 2014-06-22实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T8314—2002《茶 游离氨基酸总量测定》。本标准与GB/T8314—2002相比,主 要技术变化如下: ———添加细化pH8.0磷酸盐缓冲液的配制过程; ———修改氨基酸标准曲线制作的技术内容,使之与样品测定过程相同; ———重复性:两次测定结果的差值,每100g样品的游离氨基酸总量应不超过0.1g,修改为在重复 条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由全国茶叶标准化技术委员会(SAC/TC339)归口。 本标准起草单位:中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心。 本标准主要起草人:徐建峰、周卫龙、陆小磊、王瑾、沙海涛。 GB/T8314的历次版本发布情况为: ———GB/T8314—1987、GB/T8314—2002。 ⅠGB/T8314—2013 茶 游离氨基酸总量的测定 1 范围 本标准规定了茶叶中游离氨基酸总量测定的仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算的 方法。 本标准适用于茶叶中游离氨基酸总量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T8302 茶 取样 GB/T8303 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定 GB/T8312 茶 咖啡碱测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 游离氨基酸 freeaminoacids 茶叶水浸出物中呈游离状态存在的具有α-氨基的有机酸。 4 原理 α-氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热,形成紫色络合物,用分光光度法在特定的波长下测定 其含量。 5 仪器和用具 5.1 分析天平:感量0.001g。 5.2 分光光度仪。 5.3 比色管:具塞,25mL。 6 试剂和溶液 6.1 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯(AR),水为蒸馏水。 6.2 pH8.0磷酸盐缓冲液 6.2.1 1/15mol/L磷酸氢二钠:称取23.9g十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),加水溶解后转入 1L容量瓶中,定容至刻度,摇匀。 1GB/T8314—2013 6.2.2 1/15mol/L磷酸二氢钾:称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾(KH2PO4)9.08g,加水溶解后转 入1L容量瓶中,定容至刻度,摇匀。 6.2.3 取1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液(6.2.1)95mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液(6.2.2)5mL, 混匀,该混合溶液pH为8.0。 6.3 2%茚三酮溶液:称取水合茚三酮(纯度不低于99%)2g,加50mL水和80mg氯化亚锡 (SnCl2·2H2O)搅拌均匀。分次加少量水溶解,放在暗处,静置一昼夜,过滤后加水定容至100mL。 6.4 茶氨酸或谷氨酸系列标准工作液 6.4.1 10mg/mL标准储备液:称取250mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99%)溶于适量水中,转移 定容至25mL,摇匀。该标准储备液1mL含有10mg的茶氨酸或谷氨酸。 6.4.2 移取0.0mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL标准储备液(6.4.1),分别加水定容至 50mL,摇匀。该系列标准工作液1mL分别含有0mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg茶氨酸 或谷氨酸。 7 操作方法 7.1 取样 按GB/T8302的规定。 7.2 试样制备 按GB/T8303的规定。 7.3 测定步骤 7.3.1 试液制备 按GB/T8312中4.4.1的规定。 7.3.2 测定 准确吸取试液(7.3.1)1mL,注入25mL比色管(5.3)中,加0.5mLpH8.0磷酸盐缓冲液(6.2)和 0.5mL2%茚三酮溶液(6.3),在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25mL。放置10min后, 用5mm比色杯,在570nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。 7.3.3 氨基酸标准曲线的制作 分别吸取1mL茶氨酸或谷氨酸系列标准工作液(6.4.2)于一组25mL比色管(5.3)中,各加pH8.0 磷酸盐缓冲液(6.2)0.5mL和2%茚三酮溶液(6.3)0.5mL,在沸水浴中加热15min,冷却后加水定容至 25mL,按7.3.2的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准 曲线。 8 结果计算 8.1 计算方法 茶叶中游离氨基酸含量以干态质量分数(%)表示,按式(1)计算: 游离氨基酸总量(以茶氨酸或谷氨酸计)=C/1000×V1/V2 m×w×100%……………(1) 2GB/T8314—2013 式中: C———根据7.3.2测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸或谷氨酸的毫克数,单位为毫克 (mg); V1———试液总量,单位为毫升(mL); V2———测定用试液量,单位为毫升(mL); m———试样用量,单位为克(g); w———试样干物质含量(质量分数),%。 如果符合重复性(8.2),取两次测定的算术平均值作为结果,保留小数点后1位。 8.2 重复性 在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。GB/T8314—2013 3102—4138T/BG 中华人民共和国 国家标准 茶 游离氨基酸总量的测定 GB/T8314—2013 * 中国标准出版社出版发行 北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029) 北京市西城区三里河北街16号(100045) 网址:www.gb168.cn 服务热线:400-168-0010 010-68522006 2014年5月第一版 * 书号:155066·1-48896 版权专有 侵权必究