ICS71.100.40 Y43 中华人民共和国国家标准 GB/T32118—2015 牙膏中甲醛含量的测定 高效液相色谱法 Determinateionofformaldehydeintoothpaste— Highperformanceliquidchromatography 2015-10-09发布 2016-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SAC/TC492/SC1)归口。 本标准起草单位:上海美加净日化有限公司。 本标准主要起草人:陈健芬、施裔磊。 ⅠGB/T32118—2015 牙膏中甲醛含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了牙膏中甲醛含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于牙膏中添加有甲醛的含量测定,不适用于含有其他甲醛释放剂的牙膏产品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 将牙膏用水溶解,离心和分离后,上清液以2,4-二硝基苯肼为衍生化试剂,在加热的条件下反应生 成甲醛衍生物2,4-二硝基苯腙,用带紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定,对照标准工作曲线计算 样品中甲醛的含量。 甲醛与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙的反应式如图1所示。 图1 甲醛衍生化反应式 4 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 乙腈:色谱纯。 4.2 甲醛标准溶液(10.0mg/mL):安培瓶封装,置于10℃以上保存,使用时与室温平衡,摇动均匀,打 开后推荐一次性使用,或者将标准溶液转移至棕色瓶密封,于10℃以上保存。 4.3 冰乙酸:分析纯。 4.4 乙酸钠:分析纯。 4.5 2,4-二硝基苯肼:纯度≥99%。 4.6 乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH=5.0):称取2.64g乙酸钠,以适量水溶解,加入1.0mL冰乙酸,用水定 1GB/T32118—2015 容至500mL。 4.7 2,4-二硝基苯肼溶液(0.6g/L):称取2,4-二硝基苯肼300mg,用乙腈溶解并定容至500mL。 4.8 甲醛标准储备液:精密移取甲醛标准溶液(4.2)0.5mL于100mL容量瓶中,用水定容至刻度,制 得甲醛浓度为0.05mg/mL的标准储备液。 4.9 甲醛标准工作溶液:分别移取0.5mL,1mL,2mL,3mL,4mL,5mL的甲醛标准储备液(4.8)于一组 10mL的容量瓶中,用水定容至刻度,配制浓度为2.5μg/mL,5μg/mL,10μg/mL,15μg/mL,20μg/mL, 25μg/mL的标准工作液。 4.10 微孔滤膜:0.45μm,有机相。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪(HPLC):配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2 分析天平:感量0.0001g。 5.3 磁力搅拌器。 5.4 离心机。 5.5 恒温水浴锅。 6 分析步骤 6.1 样品制备 精密称取牙膏样品约5g(精确至0.0001g),用水定容至100mL容量瓶中,搅拌至均匀离心分离 (4000r/min)10min,准确移取2mL上清液于10mL比色管中,加入3mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液 (pH=5.0)后,用0.6g/L的2,4-二硝基苯肼溶液定容,盖上塞后混匀。将比色管移入60℃水浴锅中进 行衍生,反应时间为1h。反应完成后,冷却至室温,经0.45μm有机系微孔滤膜过滤后,供HPLC进样 测定。 6.2 甲醛衍生物标准溶液的制备 分别移取4.9中各浓度的系列标准工作溶液2mL于一组10mL比色管中,加入3mL乙酸-乙酸 钠缓冲溶液(pH=5.0)后,用0.6g/L的2,4-二硝基苯肼溶液定容,盖上塞后混匀。将比色管移入60℃ 水浴锅中进行衍生反应,时间为1h。反应完成后,冷却至室温,经0.45μm有机系微孔滤膜过滤后,供 HPLC进样测定。 注:标准溶液、空白溶液与样品溶液需同时进行衍生。 6.3 测定 6.3.1 色谱分离条件 a) 液相色谱柱:DionexAcclaimTM120型C18色谱柱(3μm,3×150mm),或相当的色谱柱; b)流动相:乙腈:水=60∶40(体积比); c)流速:1.0mL/min; d)柱温:30℃; e)检测器:二极管阵列检测器或紫外检测器; f)检测波长:360nm; g)进样量:20μL。 2GB/T32118—2015 6.3.2 标准工作曲线的绘制 将甲醛系列标准工作液的衍生液(6.2)按浓度从低到高依次导入液相色谱仪进行测定,以甲醛衍生 物的峰面积为纵坐标,以系列标准溶液中甲醛的浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。 甲醛标准样品的二极管阵列检测器液相色谱图参见附录A中的图A.1。 6.3.3 定量分析 本方法采用标准工作曲线法测定甲醛的含量。样品溶液和试剂空白溶液导入液相色谱仪进行测 定。以样品溶液中甲醛衍生物的峰面积与标准曲线比较定量。待测物的响应值均应在线性范围内。 6.4 空白实验 除不称取样品外,均按上述样品处理步骤和测定条件进行。 6.5 平行实验 按以上步骤,对同一样品进行平行试验测定。 7 结果计算 样品中甲醛的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算,计算结果需扣除空白值。测定结果用平行 测定结果的算术平均值表示。 X=c×V×k×1000 m×1000…………………………(1) 式中: X———样品中甲醛的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c———样品中甲醛衍生物面积对应的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———样液最终定容体积,单位为毫升(mL); k———稀释倍数; m———样品的质量,单位为克(g)。 8 检出限 本方法牙膏中甲醛的检出限为20mg/kg。 9 回收率 本方法的回收率在95%~110%,相对标准偏差小于5%。GB/T32118—2015 GB/T32118—2015 附 录 A (资料性附录) 甲醛标准样品的二极管阵列检测器液相色谱分离图 图A.1 甲醛标准样品的二极管阵列检测器液相色谱分离图